发明名称：检测抗HIV抗体的ADCC活性的方法
摘要
本发明涉及分子病毒学和基因工程领域。具体地，本发明涉及一种HIV包膜蛋白，其编码序列，以及包含其的HIV假病毒，所述HIV假病毒可用于检测抗HIV抗体的ADCC活性。本发明还涉及一种用于检测抗HIV抗体ADCC活性的试剂盒。本发明还涉及一种使用HIV假病毒检测抗HIV抗体的ADCC活性的方法，其可快速、简单、高通量的实现对抗HIV抗体ADCC活性的检测，对分析疫苗免疫反应的保护效果、新疫苗的研制和质控具有重要意义。
权利要求
1.一种重组包膜蛋白，其包含AE型HIV病毒包膜蛋白的笫1-476位氨基酸残基以及B亚 型HIV病毒包膜蛋白的笫463-847位氨基酸残基，其中所述AE型HIV病毒包膜蛋白的第1-476 位氨基酸残基与所述B亚型HIV病毒包膜蛋白的第463-847位氨基酸残基的N端连接；
优选地，所述AE型HIV病毒包膜蛋白为病毒株GX88的包膜蛋白；更优选地，所述AE型HIV 病毒包膜蛋白具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；
优选地，所述B亚型HIV病毒包膜蛋白为病毒株SF162的包膜蛋白；更优选地，所述AE型 HIV病毒包膜蛋白具有如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；
优选地，所述重组包膜蛋白具有如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列。
2.一种分离的核酸，其编码权利要求1所述的重组包膜蛋白；
优选地，所述分离的核酸具有如SEQ ID NO：4所示的核苷酸序列。
3.一种载体，其包含权利要求2所述的分离的核酸；
优选地，所述载体为表达载体；
优选地，所述载体为真核表达载体。
4.一种用于组装HIV假病毒的系统，其包含表达权利要求1所述的重组包膜蛋白的表达 载体和包装载体；
优选地，所述包装载体能够表达gag、pol、tat和vpu蛋白；
优选地，所述包装载体为包含缺失了env基因的HIV基因组的载体；
优选地，所述包装载体为质粒。
5.一种宿主细胞，其包含权利要求2所述的分离的核酸、权利要求3所述的载体或权利 要求4所述的系统；
优选地，所述宿主细胞选自原核细胞(例如，大肠杆菌细胞)或真核细胞(例如，酵母细 胞、昆虫细胞或哺乳动物细胞)；
优选地，所述宿主细胞为哺乳动物细胞，例如灵长类动物细胞，例如人类细胞；
优选地，所述宿主细胞选自HEK293、HEK293T、或HEK293FT细胞。
6.一种HIV假病毒，其包含权利要求1所述的重组包膜蛋白。
7.制备权利要求6所述的HIV假病毒的方法，其包括在宿主细胞中表达权利要求1所述 的重组包膜蛋白的步骤；
优选地，所述方法包括下述步骤：
(1)将表达权利要求1所述的重组包膜蛋白的表达载体和包装载体共转染宿主细胞；
(2)在宿主细胞中表达所述表达载体和包装载体所编码的蛋白，所述蛋白能够自发组 装成HIV假病毒；和
(3)收集HIV假病毒；
优选地，所述包装载体能够表达gag、pol、tat和vpu蛋白；
优选地，所述包装载体为包含缺失了env基因的HIV基因组的载体；
优选地，所述宿主细胞为真核细胞，例如哺乳动物细胞，例如灵长类动物细胞，例如人 类细胞；
优选地，所述宿主细胞选自HEK293、HEK293T、或HEK293FT细胞。
8.试剂盒，其包括权利要求1所述的重组包膜蛋白、权利要求2所述的分离的核酸、权利 要求3所述的载体、权利要求4所述的系统、权利要求5所述的宿主细胞、或权利要求6所述的 HIV假病毒；
优选地，所述试剂盒还包括能够检测细胞存活率的试剂；
优选地，所述能够检测细胞存活率的试剂通过测定LDH水平来测定细胞存活率；更优选 地，所述能够检测细胞存活率的试剂包括乳酸和四唑鎓化合物(例如，INT)；
优选地，所述试剂盒还包含靶细胞和/或效应细胞；
优选地，所述靶细胞为哺乳动物细胞，例如灵长类动物细胞，例如人类细胞；更优选地， 所述靶细胞为人淋巴细胞，例如人CD4阳性T淋巴细胞；
优选地，所述效应细胞选自PBMC、NK细胞、单核细胞、细胞毒T细胞或中性粒细胞；
优选地，所述试剂盒用于检测抗HIV抗体的ADCC活性；更优选地，所述试剂盒用于检测 抗HIV-1抗体的ADCC活性。
9.权利要求1所述的重组包膜蛋白、权利要求2所述的分离的核酸、权利要求3所述的载 体、权利要求4所述的系统、权利要求5所述的宿主细胞、或权利要求6所述的HIV假病毒用于 制备试剂盒的用途，所述试剂盒用于检测抗HIV抗体的ADCC活性；
优选地，所述试剂盒用于检测抗HIV-1抗体的ADCC活性。
10.检测包含抗HIV抗体的待测样品的ADCC活性的方法，其包括下述步骤：
(1)使用HIV假病毒感染靶细胞；
(2)将步骤(1)中的靶细胞与效应细胞和待测样品接触；和
(3)检测靶细胞的细胞存活率，从而确定待测样品的ADCC活性；
优选地，在步骤(1)中，所述HIV假病毒包含权利要求1所述的重组包膜蛋白；更优选地， 在步骤(1)中，所述HIV假病毒通过权利要求7所述的方法制备得到；
优选地，在步骤(1)中，所述靶细胞为哺乳动物细胞，例如灵长类动物细胞，例如人类细 胞；更优选地，所述靶细胞为人淋巴细胞，例如人CD4阳性T淋巴细胞；
优选地，在步骤(2)中，所述效应细胞选自PBMC、NK细胞、单核细胞、细胞毒T细胞或中性 粒细胞；
优选地，在步骤(3)中，通过测定LDH水平来测定细胞存活率；
优选地，所述抗HIV抗体为抗HIV-1抗体；
优选地，所述抗HIV抗体为单克隆抗体或多克隆抗体；
优选地，所述待测样品为来自受试者的抗血清；更优选地，所述受试者为哺乳动物，例 如灵长类动物，例如人。